馬傳染性貧血症檢驗方法
馬傳染性貧血症檢驗採用免疫擴散反應試驗 <p />一、免疫擴散反應試驗: <br />(一)抗原:馬傳染性貧血病毒實驗感染之馬脾臟或經細胞培養增殖所得 之培養液,再經精製濃縮供為免疫擴散法檢驗馬傳染性貧血抗體用 之抗原。 <br />(二)陽性對照血清:健康馬接種馬傳染性貧血病毒後之不活化血清。 <br />(三)瓊膠平板的製作方法: 瓊脂(Noble Agar)一公克,加入於一○○公撮硼酸鹽緩衝溶液( 附錄一)內煮沸溶解後,再經攝氏一二一度,十五磅壓力的高壓蒸 氣滅菌七分鐘,待冷卻至攝氏四十五度,取十八公撮置入直徑十公 分寬的培養皿內製成平板瓊脂凝膠層。 <br />(四)使用方法: 凝固後的瓊膠平板,用打孔器打出由中央一個,周圍六個,共七個 小孔的反應組。其每一小孔之直徑為五公釐,各小孔距離為三公釐 。反應組中心孔加入○.○五公撮抗原。周圍六個孔以間隔順序分 別各加入對照血清及受檢血清○.○五公撮,最後將加入各檢體的 瓊膠平板置於能保持濕度、溫度(攝氏二十至二十五度)的密閉容 器內反應。 <p />二、反應結果: 免疫擴散反應試驗於反應後二十四至四十八小時觀察沈澱線,但得觀 察至九十六小時判定。依下列方法判定之: <br />(一)陽性:抗原與受檢血清之間產生能和抗原與對照血清之間所產生之 沈澱線(以下稱標準沈澱線)融合者。 <br />(二)陰性:抗原與受檢血清之間無產生與標準沈澱線融合之沈澱線,標 準沈澱線接近加入受檢血清之孔或者碰到者。 <br />(三)疑陽性:不屬陽性或陰性者。 <br />(四)非特異性:抗原與受檢血清之間產生與標準沈澱線不融合之沈澱線 且形成交叉狀。 <p />三、判定標準: <br />(一)有下列情形之一者,為罹患馬傳染性貧血症馬匹: 1.免疫擴散反應試驗呈陽性者。 2.免疫擴散反應試驗呈疑陽性者,經再複驗一次,其結果仍呈疑陽 性或陽性者。 <br />(二)免疫擴散反應試驗呈疑陽性者,為疑患馬傳染性貧血症馬匹。 <br />(三)免疫擴散反應試驗呈陰性及非特異性者為健康馬匹。 <p />四、複檢:疑陽性者應於初檢後二十一日再複驗一次,其結果仍呈疑陽性 或轉呈陽性者為陽性,轉為陰性者為陰性。 <p />五、檢驗次數:每年檢驗一次。 <p />六、進口馬匹之檢疫: 進口馬匹於檢疫期間,經檢驗判定為陰性者,准予放行;陽性者,立 即撲殺。疑陽性者,另行隔離,經二十一日再行複驗一次,倘仍為疑 陽性或轉為陽性者,立即撲殺;轉為陰性者,准予放行。