新城病檢驗方法
壹、前言 新城病 (Newcastle disease ,以下簡稱 ND) 是由副粘液病毒科 ( Paramyxoviridae) 的 Avulavirus 屬新城病病毒 (Newcastle dis- ease virus,以下簡稱 NDV) 所引起。禽類副粘液病毒 (paramyxov- irus,以下簡稱 PMV) 在血清學的分類可分為 PMV-1 (paramyxovir- us type 1) 至 PMV-9 (paramyxovirus type 9) 等 9 個血清型; ND 病毒為 PMV-1 型。本病自 1926 年首次發現以來,已廣佈於全 球大部份國家,因此世界各地雞隻大都需以疫苗來進行防疫。NDV 依 其對雞感染的病原性高低和臨床症狀分為 5 個病原型包括:(1) 強 毒內臟型:具有高病原性,常見胃腸出血病變,(2) 強毒神經型:呈 現高度死亡率,通常有呼吸及神經症狀,(3) 中間毒型:呈現呼吸症 狀,偶有神經症狀,但具低死亡率,(4) 弱毒型或呼吸道型:呈現輕 微或無臨床症狀的呼吸道感染及 (5) 無症狀腸道型:沒有臨床症狀 的腸道感染型。本病不易區別其病原型,即使病毒感染無特定病原 ( SPF) 雞也會出現前述重疊的病狀,其中弱毒株感染時會因其他病原 重複感染或環境情況不良而加劇本病臨床症狀,且病毒感染不同宿主 也有不同的反應,使得 ND 在臨床診斷上頗為困難,因此若單靠臨床 症狀來診斷本病常無法得到正確的診斷結果。 我國對新城病的定義是大腦內接種致病性指數 (intracerebral pat- hogenicity index,以下簡稱 ICPI) 在 0.7 以上或融合蛋白 (F protein) 氨基酸序列第 113 至 116 個位置具有 3 個以上鹼性 氨基酸且第 117 個位置為苯丙氨酸 (phenylalanine)。
貳、臨床症狀 <p />一、一般症狀 臨床症狀的嚴重程度因病毒株及感染鳥類的年齡、免疫狀況、種別等 因素而異,由幾乎無明顯的呼吸症狀到非常嚴重的沈鬱、產蛋量下降 、呼吸頻率增加、大量下痢後死亡或存活者出現神經症狀。嚴重病型 之死亡率可達 100%。潛伏期常為 5 至 6 天,亦可能為 2 至 1 5 天。 <p />二、強毒內臟型 病程甚短,臨床上一發病就開始死亡,病雞出現食慾廢絕,體溫上升 至 42 至 43 ℃。病雞會出現精神沉鬱、嗜眠、逆毛及排出帶有白色 的濃綠色下痢便,聚集在角落不動。眼、喉及臉部常見水腫,並由喉 頭發出囉音及奇音或開口呼吸,無法起立及抽搐,一般經 1 至 3 日病程後就死亡。病程較長者開始出現斜頸、歪頭及腳麻痺。急性型 之死亡率在 90 %至 100%。 <p />三、強毒神經型 主要症狀為沉鬱、呼吸症狀、下綠色便及神經症狀等。產蛋降低或停 止,肉垂及肉冠呈暗紫色,中雞以下的症狀較嚴重。病程經過較為慢 性,成雞死亡率約 5%,小雞死亡率為 50 至 80 %。 <p />四、中間毒型 輕微的呼吸症狀及下痢,產蛋下降或停止。其死亡率低。 <p />五、弱毒型 主要造成中等程度或不顯性的呼吸道感染,其死亡率極低。 <p />六、無症狀腸道型 無臨床症狀或無病理學上變化。
參、病理變化 <p />一、肉眼病理變化 <br />(一) 強毒內臟型病變 主要的病變在消化道 (腺胃及腸管) 的出血、潰瘍及壞死等病變。 腺胃出血病變易出現於食道或腺胃移行部,有時全面性出血;腸管 淋巴組織易出現出血、潰瘍及壞死等病灶;脾臟有時會出現白色壞 死點;出現呼吸症狀之病例可見氣管粘膜增厚、充出血及滲出液增 加。結膜充出血及眼瞼與顏面腫賬;卵巢異常;共泄腔充出血;華 氏囊肥厚、水腫及充出血。心冠狀溝點狀出血。 <br />(二) 強毒神經型病變 主要的病變在呼吸道,包括氣管粘液增加、粘膜增厚、氣囊輕度混 濁、增生增厚及肺炎之病變。 <p />二、組織病理變化 <br />(一) 全身各淋巴組織如脾、胸腺、華氏囊、盲腸扁桃、消化道及呼吸道 之粘膜固有層、腦之血管周圍的淋巴球會崩壞及消失,並有巨噬細 胞之增生。脾、胸腺及消化道的病灶伴有纖維素滲出。氣管上皮細 胞增生。 <br />(二) 急性病例的中樞神經系統可見血管周圍性淋巴細胞的增殖、神經細 胞的壞死及小神經膠細胞反應。病程較長者血管周圍的浸潤細胞由 漿細胞轉為淋巴球,大腦、中腦、視葉、延腦及小腦出現壞死灶。
肆、實驗室檢驗 <p />一、病毒檢驗 <br />(一) 採取病材 1 由新鮮死雞或瀕死雞之臟器分離病毒較佳。因此,由病死雞中採 取口、鼻拭子及肺、腎、腸 (包括腸內容物) 、脾、腦、肝及心 臟等組織臟器。所採取之組織臟器可以分開或混合,但腸管則通 常分開放置。 2 活雞採樣包括氣管及共泄腔拭子,共泄腔拭子一定要包含有糞便 。小型脆弱的禽類可能受限於拭子太大而不容易採取,則以收集 排出之新鮮糞便代之。 3 採取的試材應放m在磷酸鹽緩衝溶液 (phosphate buffered sal- ine ,以下簡稱PBS) 內,pH 7.0 至 7.4, 含抗生素。所加抗 生素可因地置宜,如組織及氣管拭子添加 penicillin (2,000 u /ml) 、streptomycin (2 mg/ml) 或 gentamicin (50 g/ml) ,前述糞便及共泄腔拭子試材則須提高抗生素濃度 5 倍以上。 添加抗生素後必須調整 pH 值為 7.0 至 7.4。糞便及組織研製 成 10 至 20 % (w/v) 乳劑。乳劑在室溫放置 1 至 2 小時 後應馬上進行試驗,如存放在 4℃不可超過 4 天。 <br />(二) 病毒分離 1 糞便或組織乳劑經由 1,000 g 轉速離心 10 分鐘,溫度不超過 25℃,所得上清液經 0.45 m 過濾膜濾過後之濾液接種於 9 至 11 日齡 SPF 雞胚尿囊腔內,每個雞胚各接種 0.2 ml 。接 種後在 35 ℃至 37 ℃恒溫箱中靜置觀察 4 至 7 天。 2 將死胚蛋與未死亡胚蛋放置在 4℃,待 10 小時以上降溫後抽取 尿囊液,同時取少量尿囊液與 5%雞紅血球懸浮液進行平板血球 凝集試驗或 1%雞紅血球懸浮液進行試管血球凝集試驗 (hemag- glutination test,以下簡稱 HA),以檢測血球凝集素 (hemag- glutinin) 活性之有無,若呈陰性反應則應再盲目繼代增殖2次。 <br />(三) 病原鑑定 血球凝集試驗中,A 型流行性感冒病毒或其他 8 種血清型副粘液 病毒或含有血球凝素的細菌等亦會產生血球凝集現象,因此,均會 影響判定。此時可以使用特異新城病抗血清進行血球凝集抑制試驗 &nbs